下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法
1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样 可能原因：1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；
3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法：1） 标本为血清：最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。2) 加样后及时放入孵箱。3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。4) 如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。5) 标本较多时，请分批操作。
3 孵育 可能原因：1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。解决办法：1) 贴封片或加盖；2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板 可能原因：1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。3) 反应板过多造成洗板等待时间长。解决办法：1) 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；2) 合理安排，或多用几台洗板机。
5 显色 可能原因：1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法：1) 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；2) 加样时保持显色剂不外流；3) A、B液应避免接触金属器械。6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。
在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
感谢您的关注，祝您科研顺利！
1. 细胞增殖/毒性检测方法比较及CCK-8法活力测定
2. 定量PCR实验中熔解曲线不止一个主峰是什么原因?
3. 免疫组化IHC实验经验总结
4. SCI 文章回复信中常见问题怎么解决？
5. GraphPadPrism 8.0体验一个月后的分享！
6. 如何正确的获取和整理大量的实验数据？
7. 老鼠的编号方法怎么破？
8. 5步教你跑出漂亮的大分子western-blot图诀窍
9. 细谈流式细胞分选的原理及特点
10.Western blot 实验技术及常见问题分析
11. 【药理可投-IF4.23-年刊1500+】例文：吴茱萸碱通过激活自噬和抑制NLRP3炎性小体减轻结肠炎的损伤
12. 详解各种外科缝合法，图文并茂 ！
13. ELISA中常见问题及解决方法
14. 干货：WB, IHC实验问题总结与处理方案
15. 国自然技术路线图如何设计和绘制
16. NCBI，从一窍不通到略知一二
17. 以《自然》来举个例子，如何在顶级期刊上发表文章？
18. 最新国自然资源包含最新中标标书国自然写作指导大全，免费领取
19. Matrigel 使用常见问题分析
20. 免疫沉淀（IP）的常见问题及解答
